Матевосян К.Ш., Степанова И.И., Алексанкина В.В., Алексанкин А.П., Козловский Ю.Е.
Email: Адрес электронной почты защищен от спам-ботов. Для просмотра адреса в вашем браузере должен быть включен Javascript.
Матевосян Каринэ Шагеновна – кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник;
Степанова Ирина Ильдаровна – научный сотрудник;
Алексанкина Валентина Викторовна – кандидат биологических наук, старший научный сотрудник;
Алексанкин Андрей Павлович – кандидат биологических наук, научный сотрудник,
лаборатория патологии репродукции;
Козловский Юрий Евгеньевич – кандидат биологических наук, заведующий лабораторией,
лаборатория инфекционной патологии и молекулярной микроэкологии,
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение
Научно-иссследовательский институт морфологии человека,
г. Москва
Аннотация: гормональные гонадотропные препараты широко применяются в животноводческой практике для регулирования воспроизводительной функции животных, коррекции функциональных расстройств репродуктивной системы, получения суперовуляции у самок-доноров, сокращения сервис-периода, что повышает рентабельность в условиях интенсивного животноводства. Одним из наиболее доступных и часто применяемых гонадотропинов гипофизарного происхождения является фолликулостимулирующий гормон (ФСГ, фоллитропин) свиньи. Физиологическая роль ФСГ заключается в регуляции функции половых желез. При этом он действует совместно с ЛГ и усиливает секрецию половыми железами эстрогенов и андрогенов, повышает чувствительность половых желез к ЛГ. У самок ФСГ стимулирует рост и созревание фолликулов в яичниках, а в последующем овуляцию и развитие желтых тел. У самцов ФСГ регулирует развитие и созревание сперматозоидов в семенниках. Определение концентрации ФСГ в крови животных может быть полезным при отборе высокопродуктивных особей маточного поголовья свиней. При регулировании воспроизводительной функции и синхронизации охоты сельскохозяйственных животных важно точно определять концентрацию вводимого препарата и проводить мониторинг его содержания в крови стимулируемых особей. Нами разработана тест-система для определения концентрации ФСГ свиньи в биологических жидкостях методом твердофазного иммуноферментного анализа по «сэндвич»-типу на основе оригинальных мышиных моноклональных антител против ФСГ свиньи. Антитела, использованные в тест-системе, являются видоспецифичными и не реагируют с другими гонадотропными гормонами, что обеспечивает высокую специфичность системы и точность получаемых результатов. Технические характеристики тест-системы являются удовлетворительными: чувствительность не более 0,3 нг/мл, тесты на «открытие» и «линейность» в пределах 90-110%, коэффициент вариации для образцов с низкими, средними и высокими значениями содержания гормона не превышает 8%. Разработанная тест-система не имеет аналогов в Российской Федерации и может найти применение в ветеринарии и животноводстве.
Ключевые слова: ФСГ свиньи, моноклональные антитела, иммуноферментный анализ, тест-система.
DEVELOPMENT OF ELISA FOR THE QUANTITATIVE DETERMINATION OF THE PORCINE FOLLICLE-STIMULATING HORMONE IN BIOLOGICAL LIQUIDS
Matevosyan K.Sh., Stepanova I.I., Aleksankina V.V., Aleksankin A.P., Kozlovsky Y.E.
Matevosyan Karine Shagenovna - PhD in Medicine, Leading Researcher;
Stepanova Irina Ildarovna – Research Officer;
Aleksankina Valentina Viktorovna - PhD in Biology, Senior Researcher
Aleksankin Andrey Pavlovich - PhD in Biology, Research Officer,
LABORATORY OF REPRODUCTIVE PATHOLOGY;
Kozlovsky Yuri Evgenievich - PhD in Biology, Head the Laboratory,
LABORATORY OF INFECTIOUS PATHOLOGY AND MOLECULAR MICROECOLOGY,
FEDERAL STATE BUDGETARY SCIENTIFIC INSTITUTION
RESEARCH INSTITUTE OF HUMAN MORPHOLOGY,
MOSCOW
Abstract: hormonal gonadotropic drugs are widely used in animal husbandry practice for regulating the reproductive function of animals, correcting functional disorders of the reproductive system, obtaining superovulation in donor females, reducing the service period, which increases profitability in conditions of intensive animal husbandry. One of the most accessible and frequently used gonadotropins of pituitary origin is porcine follicle-stimulating hormone (pFSH, follitropin). The physiological role of FSH is to regulate the function of the sex glands. At the same time, it acts in conjunction with LH and enhances the secretion of the estrogen and androgen genital glands, increases the sensitivity of the sex glands to LH. In females, FSH stimulates the growth and maturation of follicles in the ovaries, and later ovulation and development of the corpus luteum. In males, FSH regulates the development and maturation of spermatozoa in the testes. Determining the concentration of FSH in the blood of animals may be useful in the selection of highly productive specimens of pigs. It’s important to accurately determine the concentration of the injected drug and monitor its content in the blood of stimulated individuals for regulating the reproductive function and synchronizing the hunting of farm animals. We have developed a test-system for determining the concentration of porcine FSH in biological fluids by enzyme-linked immunosorbent sandwich assay (ELISA) based on the original mouse monoclonal antibodies against porcine FSH. The antibodies used in the test-system are specific and unreacted with other gonadotropic hormones, which ensures a high system specificity and accuracy of the results. The technical characteristics of the test system are satisfactory: sensitivity is not more than 0.3 ng/ml, tests for "opening" and "linearity" within 90-110%, the coefficient of variation for samples with low, medium and high hormone levels does not exceed 8% The developed test system has no analogues in the Russian Federation and can be used in veterinary medicine and animal husbandry.
Keywords: porcine follicle-stimulating hormone, monoclonal antibodies, ELISA, test system.
Список литературы
- Алейникова Т.Л., Авдеева Л.В. Андрианова Л.Е. и др. Биохимия: Учеб. для вузов (под ред. Е.С. Северина). М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. 779 с. ISBN 5-9231-0254-4.
- Вербицкий М.Ш., Фидлер Р., Матевосян К.М. и др. Моноклональные антитела кантигенам и гормонам репродуктивной системы: использование в иммунологии репродукции // Иммунология, 1994. № 4. С. 26-30.
- Завертяев Б.П. Биотехнология в воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота. Л.: Агропромиздат Лен. отд., 1989. 610 с.
- Кондратьева И.А., Ярилин А.А., Егорова С.Г. и др. Практикум по иммунологии. М.: Академия, 2004. 272 с.
- Тигранян Р.А., Калита Н.Ф., Роганов А.С. Методическое руководство по проведению контроля качества наборов реагентов для иммуноферментного анализа. Министерство Здравоохранения и Медицинской Промышленности РФ, Москва, 1994. 33 с.
- Эрнст Л.К., Сергеев Н.И. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. М.: ВО Агропромиздат, 1989. С. 88-93.
- Elwell K., Howard G.C. Chemically Modifying Antibodies // Basic Methods in Antibody Production and Characterization (Eds Gary C. Howard, Delia R. Bethell), 2001 by CRC Press LLC. Chapter 14. P. 199-215.
- Knox R.V. Recent advancements in the hormonal stimulation of ovulation in swine.// Vet Med (Auckl). 2015 Oct 5;6:309-320. doi: 10.2147/VMRR.S68960.
- Kramer B. Changes in vascular permeability and deciduoma formation during the peri-implantation period of the rat in response to exogenous gonadotropins // Anat Rec., 1997 Jan; 247(1):20-4.
- Nakane K., Kawaoi A.J. Peroxidase-labeled antibody. A new method of conjugation. // J. Histochem Cytochem., 1974 Dec; 22 (12):1084-91. DOI: 10.1177/22.12.1084.
- Papkoff H. Chemistry of the gonadotropins // Reproduction in Domestic Animals. 2nd Edition (Eds Cole H.H., Cupps P.T.). eBook ISBN: 9781483263151 Imprint: Academic Press Published Date: 1st January 1969. 684 p. ( 70-72).
- Pierce J.G., Parsons T. Glycoprotein hormones: structure and function // Annu Rev Biochem. 1981; 50:465-95. DOI:10.1146/ annurev.bi.50.070181.002341.
Ссылка для цитирования данной статьи
|
|
Тип лицензии на данную статью – CC BY 4.0. Это значит, что Вы можете свободно цитировать данную статью на любом носителе и в любом формате при указании авторства. |
Матевосян К.Ш., Степанова И.И., Алексанкина В.В., Алексанкин А.П., Козловский Ю.Е. РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ГОРМОНА СВИНЕЙ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА // Наука, техника и образование №11 (52), 2018. - С.{см. журнал}.
|